Роль кисспептина в регуляции формирования и функциональной активности Т-регуляторных клеток и T-хелперов 17 (Th17) во время беременности
1 этап. Изучены эффекты кисспептина в концентрациях, сопоставимых с его уровнем в периферической крови в разные триместры беременности, в регуляции формирования Т-регуляторных лимфоцитов (Тreg) и уровня интерлейкин-17-продуцирующих (IL 17) лимфоцитов (Th17) из CD4+Т-лимфоцитов периферической крови. Также определяли продукцию цитокинов IL-10 и IL-17 Т-лимфоцитами периферической крови в системе in vitro. Показано, что кисспептин в концентрациях, характерных для I-III триместра беременности, усиливает формирование адаптивных Treg из TGF-beta1 (трансформирующий фактор роста beta1)-примированных CD4+Т-лимфоцитов (CD4+FOXP3+) (транскрипционный фактор (forkhead box P3) - основной маркер Тreg) и экспрессию на них CTLA-4 (CD4+FOXP3+CTLA-4+) и GITR (глюкокортикоид индуцированный TNF-рецептор) (CD4+FOXP3+GITR+). Показано, что кисспептин в исследуемых дозах угнетает формирование Th17 из IL-1beta/IL-6-примированных CD4+Т-лимфоцитов периферической крови, снижая в них экспрессию сиротного рецептора gamma ретиноидов (RORgammat+) и уровень дубль-позитивных RORgammat+IL-17А+-лимфоцитов. Выявлено, что кисспептин, независимо от используемой концентрации, повышает продукцию IL-10, снижая при этом уровень IL-17A в супернатантах фракционированных CD4+Т-лимфоцитов женщин. Таким образом, кисспептин, увеличивая количество Treg и их функциональную активность (экспрессия CTLA-4 и GITR), параллельно угнетая Th17, является индуктором формирования иммунологической толерантности на периферии, непосредственно контролируя баланс Treg/Th17.
2 этап. Изучены молекулярные механизмы реализации эффектов кисспептина в концентрациях, сопоставимых с его уровнем в периферической крови в II-III триместры беременности с помощью ингибиторного анализа. Установлено, что ингибитор CREB (сAMP response element-binding protein) – KG-501 достоверно угнетает формирование адаптивных Treg (CD4+FOXP3+) и Th17 (CD4+RORgammat+). Ингибитор тирозин/сериновой протеинкиназы (MEK1,2) – U0126 (1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis[2-aminophenylthio] butadiene) также угнетает формирование Treg (CD4+FOXP3+) и Th17 (CD4+RORgammat+). Кисспептин на фоне блокада как CREB так и MEK1,2 достоверно снижает экспрессию как FOXP3+, так и RORgammat+. При параллельном определении уровня цитокинов в супернатантах фракционированных CD4+Т-лимфоцитов выявлено, что кисспептин повышает продукцию IL-10, одновременно снижая уровень IL-17A. На фоне ингибиторов кисспептин снижает продукцию IL-10 и IL-17A. При исследовании влияния кисспептина на уровень внутриклеточного сАМР показано, что гормон дозозависимо повышает данный показатель.
