Историческая справка
Памяти Н.Н. Кеворкова посвящается!
Юбилей В.А. Черешнева
Юбилей И.Б. Ившиной
Основные направления исследований
Дирекция
Ученый совет
Сотрудники научных подразделений
Официальные документы
Службы института
Охрана труда
Профсоюзный комитет
Вакансии
Контактная информация
Лаборатория алканотрофных микроорганизмов
Лаборатория адаптации микроорганизмов
Лаборатория физиологии и генетики микроорганизмов
Лаборатория молекулярной биотехнологии
Лаборатория микробиологии техногенных экосистем
Лаборатория биохимии развития микроорганизмов
Лаборатория клеточной иммунологии и нанобиотехнологии
Лаборатория экологической иммунологии
Лаборатория иммунорегуляции
Группа физико-химических исследований
Кафедра микробиологии и иммунологии
Региональная профилированная коллекция алканотрофных микроорганизмов (ИЭГМ)
Поиск публикаций
2024 2023 2022 2021 2020 2019 2018 2017 2016 2015 2014 2013 2012 2011 2010 2009 2008 2007 2006 2005 2004 2003 2002 2001 2000 1999 1998 1997 и ранее
Поиск разработок
Новые материалы
Экология
Электротехника и обработка материалов
Медицина
Поиск конференций
Планируемые и прошедшие в 2024 году
Прошедшие в 2023 году
Прошедшие в 2022 году
Прошедшие в 2021 году
Прошедшие в 2020 году
Прошедшие в 2019 году
Прошедшие в 2018 году
Прошедшие в 2017 году
Прошедшие в 2016 году
Прошедшие в 2015 году
Прошедшие в 2014 году
Прошедшие в 2013 году
Прошедшие в 2012 году
Прошедшие в 2011 году
Прошедшие в 2010 году
Прошедшие в 2009 году
Прошедшие в 2008 году
Прошедшие в 2007 году
Прошедшие в 2006 году
Прошедшие в 2005 году
Прошедшие в 2004 году и ранее
Доклады наших сотрудников
Библиотека
Издательства
Журналы
Другие библиотеки
Научные фонды
Электронный каталог библиотеки ИЭГМ УрО РАН
Обьявления
Специальности и реквизиты
Документы
О нас
Устав
Отчеты о работе СМУ
Нормативные документы
Конференции
Конкурсы и Гранты
Ссылки
Специальности
Состав
Документы соискателей
Ближайшее заседание
Сведения о защищенных диссертациях
Контактная информация
 
 Публикации / Сравнительная характеристика рекомбинантных Escherichia coli lux+, используемых для оценки фагоцитоза   Карта сайта     Language По-русски По-английски
 
Поиск публикаций
2024
2023
2022
2021
2020
2019
2018
2017
2016
2015
2014
2013
2012
2011
2010
2009
2008
2007
2006
2005
2004
2003
2002
2001
2000
1999
1998
1997 и ранее


Сравнительная характеристика рекомбинантных Escherichia coli lux+, используемых для оценки фагоцитоза

Фагоцитоз бактерий – динамичный процесс, исход которого определяется функциональным состоянием фагоцитирующей клетки и микроорганизма. Существующие методики позволяют оценить действие бактерицидных компонентов сыворотки крови и фагоцитоз нейтрофилов с использованием рекомбинантных бактерий E. coli lux+ по ингибированию биолюминесценции [1, 2, 3, 4]. Однако показано, что использование сенсора Эколюм-8 не позволило провести биолюминесцентный анализ фагоцитарной активности, вероятно, вследствие иного происхождения и свойств его люциферазы (lux-гены Photorhabdus luminescence) [5]. С другой стороны, у Эколюм-8 наряду с другими биолюминесцентными тест-системами (Эколюм-5, Эколюм-6, Эколюм-9) отмечена примерно одинаковая чувствительность в отношении неорганических и органических веществ [1], что, возможно, связано с особенностями методологического подхода при оценке.
Целью работы явилось проведение сравнительной характеристики рекомбинантных штаммов E. coli lux+ (lux-оперон Vibrio fischeri – Эколюм-5) и E. coli lux+ (lux-оперон P. luminescence – Эколюм-8) по уровню биолюминесценции и выживаемости при фагоцитозе с разными опсонизирующими факторами.




Материалы и методы
В работе использовали штаммы E. coli lux+ с lux-оперонами V. fischeri (Эколюм-5) и P. luminescence (Эколюм-8), созданные Даниловым с соавт. [1].
Нейтрофилы периферической крови выделяли из гепаринизованной венозной крови здоровых доноров центрифугированием в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (1,077 и 1,112 г/мл). Фагоцитарная система состояла из суспензии нейтрофилов в среде Хенкса (106 кл/мл), пула термоинактивированных (56оС, 30 мин) или интактных сывороток крови (10%) и регидратированного сенсора E. coli lux+ (106-108 кл/мл) (10%). Контрольные пробы содержали те же компоненты, но без нейтрофилов.
Индекс фагоцитарной активности (ИФА) оценивали по биолюминесценции сенсоров на планшетном люминометре Luminoscan Ascent (Финляндия) через 40 мин контакта с нейтрофилами и/или опсонинами, вычисляли по формуле: ИФА=(X1-X2)/X1×100%, где X1, X2 – интенсивность биолюминесценции контрольной и опытной пробы, соответственно [3]. Выживаемость E. coli lux+ определяли высевом на среду Эндо с ампициллином (50мкг/мл) через 40 мин контакта, количество выросших колоний (КОЕ/мл) подсчитывали через 24 ч. Индекс ингибирования роста (ИИР) рассчитывали по формуле: ИИР=(КОЕk-КОЕo)/КОЕk×100%, где КОЕk, КОЕo – число КОЕ/мл контрольной и опытной пробы, соответственно.
Результаты исследований
Установлено, что нейтрофилы проявляли более высокую фагоцитарную активность в отношении сенсора Эколюм-8 с пулом интактных сывороток по сравнению с пулом сывороток без комплемента, что подтверждалось уровнем выживаемости бактерий (ИИР) в данных системах (таблица). Поскольку оптимумы работы люциферазы данного штамма и фагоцитарных систем совпадают и составляют 37оС, влияние температуры на биолюминесценцию бактерий и ИФА отсутствовало.
В системе с сенсором Эколюм-5 активность нейтрофилов в целом была ниже, чем с Эколюм-8. Тем не менее, присутствие комплемента в сыворотке положительно влияло на фагоцитоз. Однако, более высокое значение ИИР Эколюм-5 с пулом термоинактивированных сывороток по сравнению с пулом интактных свидетельствовали об изменении способности бактерий образовывать колонии. Возможное объяснение этого связано с повышением чувствительности данного сенсора с увеличением температуры до 37оС, т.к. высокая активность люциферазы проявляется при 28-30оС. Кроме того, сложная структурная организация lux-оперона Эколюм-5 (наличие регуляторных генов, SOS-боксов) создает трудности в интерпретации изменения биолюминесценции при оценке фагоцитарных свойств нейтрофилов. Поэтому возможность применения сенсора Эколюм-5 для заявленных целей требует дальнейшего изучения. В то время как сенсор Эколюм-8 позволяет проводить оценку фагоцитоза in vitro по ингибированию биолюминесценции в физиологических условиях.
Таким образом, при проведении биолюминесцентной оценки фагоцитоза следует учитывать структурные особенности, температурные оптимумы люциферазных систем рекомбинантных штаммов E. coli lux+.

Дизайн и программирование N-Studio
© 2005-2024 ИЭГМ
беременность, мода, красота, здоровье, диеты, женский журнал, здоровье детей, здоровье ребенка, красота и здоровье, жизнь и здоровье, секреты красоты, воспитание ребенка рождение ребенка,пол ребенка,воспитание ребенка,ребенок дошкольного возраста, дети дошкольного возраста,грудной ребенок,обучение ребенка,родить ребенка,загадки для детей,здоровье ребенка,зачатие ребенка,второй ребенок,определение пола ребенка,будущий ребенок медицинский портал, медицинская библиотека, медицинские книги, медицина, клиники и больницы, болезни, врач, лечение, доктор, наркология, спид, вич, алкоголизм православные знакомства, православный сайт творчeства, православные рассказы, плохие мысли, православные психологи рождение ребенка,пол ребенка,воспитание ребенка,ребенок дошкольного возраста, дети дошкольного возраста,грудной ребенок,обучение ребенка,родить ребенка,загадки для детей,здоровье ребенка,зачатие ребенка,второй ребенок,определение пола ребенка,будущий ребенок