ВЛИЯНИЕ КИCСПЕПТИНА НА СУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ РЕГУЛЯТОРНЫХ КЛЕТОК (TH17, TREG, INKT) ТИМУСА IN VITRO
Пептидный гормон кисспептин, продуцируемый нейронами передней зоны гипоталамуса, является ключевым регулятором становления гонадостата и репродуктивной функции и обладает иммунорегуляторной активностью. При беременности кисспептин активно продуцируется плацентой, присутствует в периферической крови и оказывает влияние на клетки иммунной системы, которые экспрессируют специфические рецепторы к гормону, в том числе на клетки тимуса. Однако эффекты гормона на тимопоэз в аспекте беременности не изучены. Поэтому цель работы – изучить влияние киcспептина в концентрации, характерной для беременности, на субпопуляционный состав регуляторных клеток тимуса in vitro. Тимоциты культивировали 72 ч с кисспептином в концентрации (9,6 пМ), характеризующей его максимальный уровень в периферической крови при беременности, в присутствии CD3/CD28-активирующих частиц и далее оценивали субпопуляционный состав регуляторных клеток, экспрессию в них Ki-67, Bcl-2 методом проточной цитометрии. Оценивали процентное содержание Т-регуляторных лимфоцитов (Treg), как процент CD4+CD25+FoxP3+ клеток; T-хелперов, продуцирующих интерлейкин-17 (Th17), как процент CD4+IL-17A+RORγt+ клеток; инвариантных Т-лимфоцитов с функциями натуральных киллеров (iNKT), как процент CD3hiVa24Ja18+ клеток в культуре тимоцитов. В ряд проб для индукции апоптоза вносили дексаметазон (10-6М). Отдельно оценивали влияние примированных кисспептином плазмацитоидных дендритных клеток (пДК) тимуса на субпопуляционный состав регуляторных клеток (Th17, Treg, iNKT) в культуре тимоцитов. Для этого выделенные методом иммуномагнитной сепарации пДК тимуса культивировали сутки с кисспептином, а далее добавляли в культуру интактные аутологичные тимоциты в соотношении 1:10 и культивировали еще 72 ч. Установлено, что инкубация тимоцитов с кисспептином не влияла на процентное содержание Treg, iNKT и Th17 в культуре in vitro, а также экспрессию Ki-67 и Bcl-2 в этих клетках. В условиях индукции апоптоза дексаметазоном выявлено увеличение процента Bcl-2+Th17-клеток под влиянием кисспептина. При инкубации тимоцитов с примированными кисспептином пДК выявлено увеличение процентного содержания Th17 в культуре тимоцитов, тогда как количество Treg и iNKT не изменялось. Можно заключить, что кисспептин регулирует процентное содержание Th17 в культуре тимоцитов in vitro, опосредуя свои эффекты влиянием на пДК тимуса. А действуя непосредственно на тимоциты, увеличивает устойчивость тимических Th17 к дексаметазон-индуцированному апоптозу. В целом, полученные результаты расширяют наши представления о гормональной регуляции механизмов, контролирующих соотношение регуляторных клеток при беременности.
